副绍四田才板防测说到基因敲除,先要来自了解CRISPR/Cas基因编辑系统
CRISPR/Cas(Clustered Regularly I开建路爱益降nterspaced Short Palindromic Repeats/Cas)系统是目前被广泛运用的基因编辑系统,其原理是由CRISPR转录产生的g介求台振各往RNA介导Cas标级岩举月晚正否核酸酶靶向目标序球杂雨终余振斤矿斯喜或列,对序列进行切割。
CRISPR/Cas9基因编辑静表奏阿落带关速连实示意图
(图源:Wellcome Trust Sanger Institute,Sanger)
然后我们再来看看您问的CRISPR/Cas基因敲除
CRI360问答SPR/Cas9系统中sgRNA(smallguideRNA)识别并结合目标基因的靶向序列,引导Cas9对结合位点进行剪切,产生DNA双链断裂(double-strandbreak,D述SB),机体自身通过非同源重组(non-ho革值急均有mologousendjoining,NHEJ)的方片她万在神跑古式修复DSB,参与修复的蛋白经常会在DNA末端插入或删除配神交土视操卷杨环支几个碱基,修复后的基因由于产生突变而导致功能种支言丧失,从而实现机体内的基因敲除。
最后再来看看如何应防运般苏关下用
应用:基因敲除细胞系建立、济例虽基因敲除建立动物疾病模型。
技术优势:相较于在m践阶析肥失题行翻RNA水平“敲低”目的基因的RNAi而言,CRISPR/某止Cas9系统造成基因序列的缺失,从而能完全沉默(即敲除)目的基因。
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