全血胆碱酯酶活性的测定
——羟胺三氯化铁法
实验目的
1.掌握三氯化铁比色法的实验原理、分析步骤及酶测定的临床意义。
2.了解常见全血胆碱酯酶活性测定方法的优缺点、注意事项。
3.学会末梢血的采集。
实验原理
血液胆碱酯酶使乙酰胆碱分解为胆碱和乙酸。未被胆碱酯酶水解而剩余的乙酰胆碱和碱性羟胺反应，形成红色羌酸铁络合物。颜色深度与剩余乙酰胆碱的量成正比。在波长520nm比色定量，由水解的乙酰胆碱的量计算胆碱酯酶活性。
试剂和材料
蒸馏水
盐酸溶液(1＋2)
碱性羟胺溶液
磷酸盐缓冲液(PH＝7.20)
三氯化铁溶液
氯化乙酰胆碱标准液
分光光度计
10mL比色管
漏斗
恒温水浴箱，控温±0.5℃
采血针头
血色素吸管
采样、运输和保存
用血色素吸管，取指血20μL，注入比色管中(事先加入0.98mL磷酸盐缓冲液)，立即进行测定。
实验步骤
A样品管+0.98mL磷酸盐缓冲液+0.02mL全血37℃水浴5min
+1.0mL乙酰胆碱应用液37℃水浴30min
B对照管0.98mL磷酸盐缓冲液+0.02mL全血37℃水浴5min
+1.0mL水37℃水浴30min
C标准管1.0mL磷酸盐缓冲液37℃水浴5min+ 1.0mL乙酰胆碱应用液37℃水浴30min
D空白管1.0mL磷酸盐缓冲液37℃水浴5min+1.0mL水
37℃水浴30min
水浴之后对A、B、C、D四个试管分别进行以下操作：1.2.
