WesternBlot免疫染色时，抗MAPK（ERK）抗体会结合磷酸化MAPK（P-MAPK）吗？
我做WB时把一个样本分别用抗MAPK（ERK）抗体和抗P-MAPK抗体染色，但是我不知道抗MAPK得到的band会不会包含P-MAPK，所以不知道改怎么继续分析。... 我做WB时把一个样本分别用抗MAPK（ERK）抗体和抗P-MAPK抗体染色，但是我不知道抗MAPK得到的band会不会包含P-MAPK，所以不知道改怎么继续分析。 展开
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回答者：网友
首先，需要纠正一下，一抗直接说基因的名字就可以了，不用在基因的前面加抗字，这样会造成误解，以为是二抗呢，建议注意一下
WB实验时我们需要注意的问题：
1、从题意来看，实验中MARK抗体和磷酸化MARK抗体都是一抗，或许我们应该从抗体说明书找找细节，看一下两个抗体孵育结合的具体位点，以及两种抗体结合之后的band大小。
2、二抗的选择有两种，一种是化学发光，另一种是荧光发光，都是可以的，需要注意的是二抗的选择一定是要抗一抗的就可以了。
3、一抗和二抗孵育之后记得用PBST缓冲液洗干净，这对于后面的曝光有很大的影响。
4、两种抗体孵育出来的目的片段应该是具有特异性的，一般不会有相互结合的现象。
5、孵育出来的条带最后按照孵育出来的内参直接按照比对方法计算就可以了。
希望可以帮到你
