小鼠动脉血管分离技巧

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以下是分离小鼠动脉血管来自的步骤:
麻醉小鼠并对其进耐妈雷住的地识行无菌处理。
打开小鼠的胸、腹腔,暴露心脏,并依次剪去胸腹腔器官,直至暴露主动脉。
将主动脉完整分离出来,放入无菌平皿中,并用无菌PBS (pH 7.2)迅速转移至超净台。
用D-Hanks液反复冲洗血管,去除残留血液。
离主动脉外的脂肪组织和小血管,小心剥去外膜,至血管光滑透明。
将主动脉放入DM粉专免夫而古香自既EM液 (含4.5g/L葡萄糖,10mmol/L丙酮酸,2量又情克mmol/L谷氨酰胺,100U/L青霉素及链霉素,20%胎牛血清)中,用眼科剪纵行剪开主动脉,并用刀片轻刮内膜23遍以去除内膜。
引溶医剥离的血管转入另一个装有3ml含20% FBS D剧置岁诗MEM/F12培课安销之味养液的无菌平皿中,用眼科张大继语剪剪碎组织块大小1 mm×1 革后帮孔补施短你mm左右。
将组织块均匀种植于培养瓶底,轻轻翻转培养瓶使瓶底朝上,加入2 ml含20% FBS的新鲜DMEM/F12培养基面皮式知
将培养瓶置于37℃、5%CO2细胞培养箱中静置45h,使小块微干涸,待组织块牢固贴附于细胞瓶底,再轻轻翻转培养瓶使组织块完全浸见朝围渐剧绍没于培养液中。
放入含5%CO2的37℃培养箱,静止培养3 d后观察细胞生长情况并换液。
待细胞长满培养瓶底面积80%后进行传代操作。具体操作为:用0.25%的胰酶消化细胞并用胰酶的消化液进行传代。传代2h后吸取上清液接种于另一培养瓶中,24h后根据细胞贴壁情况收取未贴壁细胞背凯衡视停看浓象悬液,离心5min,重悬后接种到新的培养瓶中,反复多次差速贴壁法纯化细胞。
总之在操作仅诗跟好优传附松过程中要注意无菌处理和防止细胞污染问题。

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