BCA蛋白定量和 Bradford法蛋白定量有哪些区别

网友 1

最佳答案

回答者:网友

一、原理不同

BCA蛋白定量:碱性条件下,来自蛋白将Cu2+还原为北将还副洲Cu+, Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物,吸光强度与蛋白浓度成正比。测定其在562nm处的吸收值,并与标准曲线对比,即可计算待测蛋白的浓度。

Bradford法蛋白定量:在一定的浓度范围内,蛋白质-染料360问答复合物在波长为595nm处的光吸收与蛋白质含量成正比,通过测定595nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。

二、样品中物质含量不同

BCA蛋白定量:样品中高达5%的SDS,5%的Triton X-100,5%的Tween 族著已却菜友搞高20、60、80。

Bradford法蛋白定量:样品中SDS低于0空业迅孙田问吧胡合精以.01%,Triton X-100低于0.05%,Tween 20、60、80低于0.015%。

扩展资料

BCA蛋白定量的注意岩指入事项:

1、BCA蛋白定量时,吸光度可随时间的延肥少见鱼蛋任长不断加深,且显色反应满配民血各扩会随温度升高而加快,故如果浓度较低,适合较高温度孵育or延长孵统诗列品评育时间。

2、标准蛋白发未急迅液的加量应当准确,如果加量不准确,会导致制作出来的标准曲线出现偏差,影响待测样帝并际欢作既别品的浓度计算,所以一方面岁杨静顾架不终需要用梯度稀释的方法来配置标准蛋白液,另一方面应使用精确度高的移液枪。

3、为加快BCA蛋白定量测定蛋白浓度的速度可以适当用微波炉加热,但切勿过热。 

4、当结果出现空白组本身就有较高的背景,可用Bradford法蛋白定量重新测定蛋白浓度。

参考资料来源:百度百科-蛋白定量


我来回答