t淋巴细胞、细胞亚群

t淋巴细胞亚群应用cd4学弱相缩宽声和cd8单克隆抗体可将外周淋汽座帮周军迅尽第思还开巴器官或外周血中的t细胞分为cd4+cd8-和cd4-cd8+两个主石完岩要的亚群。每个亚群按照某些表面标志和功能又可分为不同的功能亚群。（一）cd4阳性细胞群1.th1和th2亚群应用th细胞克隆培养技术和细来自胞因子产生的不同，已发现小鼠cd4阳性细胞况负还格酸机群是一个不均一的亚群，可分为th1和th2，主要区别见表7-6。th1细胞能合成il-2、ifn-γ、，lt、il-3、tnf-α和gm-csf，但不能合成il-4、iil-5、il-6、il-10和il-13；而th2能合成tnf-α、il-延3、gm-csf、il-4、il-5、il-6、iil-10（细胞因记持血还今混妒验子合成抑制因子，csif）和il-13，不能合成il-2、ifn-γ和lt。此外th1和th2都能分泌三巨噬细胞360问答炎症蛋白和前脑啡肽原值烧移端某西感则。th1和th2都能辅助b合成抗体，但辅助的强度和性质不同。体外实验表明，il-4明显促进b细胞合成进己抗或跑名和分泌ige，如使lps刺激针求小鼠b细胞合成ige能力增强10-战字免万100倍。少量ifn-γ能仍什律边逐道连油完全阴断il-4对ige合成的促进作用。th2分泌il-4对ige合成有正调节作用，而th1分泌ifn-γ则起负调节作用。此外，th2通过分泌il-4和il-5辅助iga合成，分泌il-10（csif）,抑制th1细胞合成细胞因子，而th1对igg1士法东笑保扩聚合成则有抑制作用，但辅助其它几种类型ig的合成。由于th1和th2合成淋巴因子的种类不同，因而介导不同的超敏反应。il-3和il-4均能促进肥大细胞增殖，且相互有协同作用，il-5除辅助级德临握b细胞合成iga外，还能刺激骨髓嗜酸性粒细胞的集落形成，因而th2与速发型超敏反应关系密切。th1通过产生ifn-γ阻断ige合成，对速发型超敏反应有抑制作意来投走用。th1与迟发型早用委八三超敏反应有关，可能与il-2、ifn-γ等对巨噬细胞活化和促进ctl分化作用有关，此外lt也县跟为岩长义过粮滑有直接杀伤靶细胞作用。两群t掌刑晶增没织h克隆均能诱导抗原提呈细胞（apc）表达mhcⅱ类抗原，th1通过ifn-帮此丝协变集效鲜γ诱导mφ表达ia抗原，而th2通过il-4对mφ和b细胞ia抗原表达起正调节作用。在人类th1和th2细胞亚群尚未得到最后证实。从目前发表资料来看，cd4+cd45ro+前体细胞向th2效应细胞分化，而ifn-γ则对前体细胞向th2分化过程起抑制作用，因此il-4和ifn-γ在决定cd4+cd45ro+前体细胞向th1或th2分化过程中起着重要的调节作用。人t细胞经多克隆活化后，在cd4阳性细胞中il-4mrna阳性比便不到5%，而60%的cd4+细胞有ifn-γ和il-2mrna的转录。表7-6小鼠th1和th2亚群的比较th1th2合成淋巴因子种类il-2+-ifn-γ+-lt+-il-3++tnf-α++gm-csf++il-4-+il-5-+il-6-+il-10-+il-13-+辅助b细胞+++辅助ige合成-+促进肥大细胞增殖-+介导超敏反应类型迟发型速发型促进ia表达细胞mφb，mφ介导迟发型超敏反应（delayedtypehypersensitivity,dth）的t细胞亚群称为tdth，表面标志cd3+cd4+cd8-，可能相当于小鼠的th1亚群。当曾被变应原致敏的tdth再次与变应原相遇后，可释放出多种细胞因子，参与迟发型（ⅳ型）超敏反应的发生。表7-7tdth释放细胞因子参与迟发型超敏反应作用对象细胞因子生物学活性巨噬细胞巨噬细胞趋化因子（mcf）招引、聚集、活化巨噬细胞，巨噬细胞移动抑制因子（mif）增强巨噬细胞吞噬和杀伤功能巨噬细胞活化因子（maf）ifn-γ白细胞白细胞移动抑制因子（lif）招引、聚集白细胞淋巴细胞il-2淋巴细胞局部浸润、增殖ifn-γ增强杀伤功能皮肤血管皮肤反应因子（srf）增加血管通透性靶细胞淋巴毒素（lt）杀伤靶细胞mcf:macrophagechemotacticfactormif:macrophagemigrationinhibitionfactormaf:macrophageactivatingfactorlif:leukocytemigrationinhibitoryfactorsrf:skinreactivefactorlt:lymphotoxin2.抑制细胞诱导亚群和辅助细胞诱导亚群应用cd45ra、cd45ro、cd29和cd31单克隆抗体可将cd4阳性细胞群分为抑制细胞诱导亚群和辅助细胞诱导亚群。两个亚群的表面标志和功能比较见表7-8。
（1）cd31：最近发现cd31是一种新的、激活后表达水平不发生明显变化的抑制细胞诱导亚群的表面标记。cd31是一种血小板-内皮细胞胞粘附分子（pecam,gpⅱa），分子量为140kda，其结构属于免疫球蛋白超家族成员。从外周血新鲜分离的cd4细胞中，cd31mcab主要与cd45ra亚群反应，对b细胞合成igg辅助作用不明显，对cona和自身mhc（自身mlr）反应较为敏感；而cd31-的cd4细胞群中，发现有大量辅助b细胞合成igg的活性和对某些抗原刺激的回忆反应。cd45ra+的cd4细胞大激活后，尽管细胞表面丢失cd45ra，但表面cd31的表达仍不发生明显变化；而cd45ro+cd45ra-的cd4细胞激活后不能获得cd31表达。由于cd31在cd4细胞激活后仍不变化，对于鉴别抑制细胞诱导亚群和辅助细胞诱导亚群是一种有用的标志。迄今为止，许多粘附分子如cd11a/cd18(lfa-1),lfa-3,cd2和cd29（vlaβ链）主要表达在cd45ro+t细胞表面。而cd31则表达在cd45ra+cd4细胞表面。抗cd31mcab作用于naivet细胞能触发其vla-4介导的粘附作用。内皮细胞表面cd31及其配体与t细胞表面cd31及其配体相互作用很可能触发整合素介导的粘附作用。cd31如何参与cd45ra+cd4+t细胞功能以及诱导抑制性t细胞产生还有待进一步研究。
（2）cd45：cd45为异构型分子。cd45细胞膜外部多肽链可由a、b和c三种外显子编码。人幼稚t细胞只表达被抗cd45ra识别的cd45a型；记忆t细胞不表达任何a、b、c外显子产物而被抗cd45ro识别。抗cd45ra和抗cd45ro识别的都是休止型细胞，抗cd45ro所识别的记忆t细胞往往也可低水平表达一系列活化表面标记，如cd25、mhcⅱ类抗原、cd54、cd26等，提示这类细胞可能新近被激活过，由此推论记忆t细胞可能是由于持久性抗原或交叉抗原的低剂量、持续刺激得以维持其长时间存活。体外实验观察到细胞活化后见有从cd45ra向cd45ro的单向性转变，这与幼稚t细胞向记忆t细胞分化相平行。表7-8抑制细胞诱导亚群和辅助细胞诱导亚群的比较抑制细胞诱导亚群辅助细胞诱导亚群表型cd4++cd29低密度高密度cd31+-cd45cd45racd45ro粘附分子（lfa、icam）++++增殖功能cd2mcab++++cd3mcab++++cona++++抗原刺激再次反应-+++同种异体抗原++++++自身mlc++++诱导和辅助功能辅助b细胞产生抗体±+++诱导ts+++-诱导细胞介导的淋巴细胞溶解作用（cml）±+++细胞发育阶段天然（naive）记忆（memory）
（3）自身混合淋巴细胞反应：外周血b细胞和单核细胞等非t细胞在体外培养时能诱导某些自身t细胞发生增殖反应，称为自身混合淋巴细胞的应（autologousmixedlymphocytereaction,amlr）。这一部分t细胞称为自身反应性t细胞。作为刺激细胞的b细胞和单核细胞主要是通过其细胞表面的mhcⅱ类抗原来刺激自身反应性t细胞，在体外培养时加入抗mhcⅱ类抗原的抗体可阻断amlr。关玩弄amlr的生理意义尚不清楚，可能是机体的一种免疫调节机制。（2）cd8阳性细胞群根据cd28阳性或阴性可将cd8+细胞分为细胞毒性t细胞（cd8+cd28+）和抑制性t细胞（cd28+cd28-）。cd28mcab能与60-80%t细胞发生反应，包括全部cd4细胞和部分cd8细胞。1.tc(ctl)在人类ctl表型为cd3+cd4-8+cd28+。小鼠ctl表型为thy-1+、lyt-1+、lyt-2+/lyt-3+。（1）ctl的分化：静止的ctl以前体细胞（precursor）(ctl-p)形式存在，外来抗原进入机体被抗原提呈细胞（apc）加工处理，形成外来抗原与apc自身mhci类抗原的复合物，被相应ctl克隆细胞膜表面tcr/cd3所识别，抗原刺激信号和apc释放il-1共同存在的条件下，ctl-p被活化，并表达il-2r、il-4r、il-6r等多种细胞因子受体，在il-2、il-4、il-6、ifn-γ等细胞因子诱导下，迅速增殖，并分化为成熟的效应杀伤性t细胞（effectorctl）。ctl具有识别抗原的特异性，即能杀伤具有特定的外来抗原（如病毒感染靶细胞膜表面的病毒抗原）与自身mhci类抗原结合的复合物的靶细胞。有关ctl杀伤靶细胞受到mhci类抗原的限制，参见第五章“主要组织相容性复合体”第四节。从肿瘤组织周围分离获得的ctl称为肿瘤浸润淋巴细胞（tumorinfiltratinglymphocyte,til）。til在体外加il-2培养后，具有很高的杀伤肿瘤作用，目前已用于临床的肿瘤治疗。（2）ctl的识别机制：多种粘附分子参与ctl对靶细胞的识别和粘附，主要有：①lfa-1/icam-1、icam-2、icam-3，可溶性icam-1（sicam-1）可抑制ctl杀伤肿瘤细胞；②cd2/lfa-3（cd58），抗cd2mcab或抗cd58mcab均可抑制ctl效应细胞对靶细胞的杀伤；③cd8/mhci类抗原的非多态性结构域。（3）ctl的杀伤机制：tcl杀伤靶细胞的机理目前认为主要通过释放多种的介质和因子介导的。①穿孔素（perforin）:又称成孔蛋白（pore-fomingprotein,pfp）、c9相关蛋白（c9relatedprotein）或溶细胞素（cytolysin），贮存于电子稠密胞浆颗粒（electron-densecytoplasmicgranules），成熟的穿孔素分子由534个氨基酸残基组成，分子量为56-75kda，ip为6.4，穿孔素分子中央部位170-390之间的氨基酸序列与c9328-560氨酸酸序列约有20%同源性，这个区域与穿孔素和c9的多聚化和以管状形式插入到细胞膜有关。在杀伤相时，ctl细胞脱颗粒，穿孔素从颗粒中释放，在ca2+存在下，插入靶细胞膜上，并多聚化形成管状的多聚穿孔素（polyperforin），约含12-16个穿孔素分子，分子量可达1000kda。多聚穿孔素在靶细胞膜上形成穿膜的管状结构，内径平均16nm。这种异常的通道使na+、水分进入靶细胞内，k+及大分子物质（如蛋白质）从靶细胞内流出，改变细胞渗透压，最终导致细胞溶解。此过程与补体介导的溶细胞过程类似，溶解细胞过程比较迅速。ctl本身可能释放a型硫酸软骨素蛋白聚糖（proteoglycansofchondroitinsulphateatype）、硫酸软骨素a限制因子（homologousrestrictionfactor,hrf），因此可避免穿孔素对ctl自身细胞的攻击。图7-3ctl释放穿孔素杀伤靶细胞机理示意图②丝氨酸酯酶（serineestersse）:活化ctl释放多种丝氨酸酯酶，如ctla-1（又称ccp1或granzymeb）、ctla-3（又称h因子或granzymea），其作用可能类似补体激活过程中的酯酶作用，通过活化穿孔素而促进杀伤作用。③淋巴毒素（lymphotoxin,lt）:又称肿瘤坏死因子-β（tnf-β），lt可直接杀伤靶细胞，但杀伤过程较慢，其杀伤机理参见第四章“细胞因子及其受体”第二节中肿瘤坏死因子。2.ts和ts亚群抑制性t细胞（suppressortlymphocyte,ts）对免疫应答有重要的负调节功能，抑制性t细胞功能的异常，常与t自身免疫性疾病、第i型超敏反应等疾病发生有关。
（1）抑制性t细胞的证实：绵羊红细胞（sheepredbloodcell,srbc）对于小鼠是良好的免疫原，合适剂量的srbc可诱导小鼠产生高效价的抗srbc抗体。当过高剂量srbc免疫小鼠时，则抗体合成水平反而明显下降，称为高剂量免疫耐受。动物实验研究发现，将高剂量免疫耐受小鼠脾细胞转移到免疫原剂量刺激的小鼠体内时，则小鼠抗体应答水平明显下降。如高剂量免疫耐受小鼠脾细胞经抗thy-1和补体处理后再转移到免疫原剂量免疫的小鼠体内，则高剂量免疫耐受小鼠脾细胞的抑制作用消失。实验证明了在高剂量免疫耐受小鼠的脾细胞中存在有抑制作用的t细胞。表7-9抑制性t细胞的证实（1）免疫原剂量---→抗体应答+++srbs免疫小鼠
（2）高剂量srbc---------------------------------→抗体应答+免疫耐受小鼠
（3）高剂量免疫-→转移未处理脾细胞-→免疫原剂量-→抗体应答+耐受小鼠免疫小鼠
（4）高剂量免疫-→转移抗thy-1+----→免疫原剂量-→抗体应答+++耐受小鼠补体处理脾细胞免疫小鼠进一步研究证明，这种抑制细胞的表型为cd3+cd4-cd8+（小鼠cd8单抗常用lyt-2）。人的抑制性t细胞表型为cd3+cd4-cd8+cd28-。ts细胞不仅对b细胞合成和分泌抗体有抑制作用，而且对th辅助作用、迟发型超敏反应以及tc介导的细胞毒作用都有负调节作用。(2)ts细胞的亚群：ts细胞还可分为ts1、ts2和ts3不同亚群，分别起着诱导抑制、转导抑制和发挥抑制效应的作用。它们之间相互作用的确切机理还不十分清楚，可能是通过释放可溶性介质相互作用的。ts1（tsi，抗原特异性抑制性t细胞）分泌tsf1（tsif，抑制诱导因子）→作用于ts2（tst，抑制转导细胞），分泌tsf2（tstf）→作用于ts3（tse，抑制效应细胞），分泌ts3f（tsef），作用于th细胞，通过对th的抑制作用，从而对各种免疫功能起负调节作用。ts细胞群具有高度异质性，除ts1、ts2、ts3亚群外，还有一群反抑制性t细胞亚群（contra-suppressortcel，tcsl）。tcs活化后分泌反抑制性t细胞因子tcsf，直接作用于th细胞，解除ts细胞的抑制作用，使th细胞恢复辅助活性。