细胞破碎方法有哪些?

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液体剪切压力: 通过将样品从高压腔转入到低压腔时产生的快速压力落差来破碎细胞 优点:破碎快速有效,适合大体积细胞破碎 缺点:可导致样品温度升高(操作时需要冷却系统) 超声 通过高频率的声波破碎细胞 优点:操作简单 缺点:可导致样品温度升高,其很难通过冷却系统降温,剪切力有可能导致蛋白质受损,噪音较大,破碎量较小 玻璃珠磨碎 用玻璃珠的搅动来磨碎细胞 优点:对于很难破碎的细胞(如酵母)非常有用 缺点:有些慢且有噪音 渗透压 从高渗透压转向低渗透压介质 优点:操作简便,花费低廉 缺点:仅用于外壁较脆弱的细胞(如动物细胞) 反复冻融 通过反复形成冰晶破碎细胞;通常结合酶法裂解下细胞 优点:操作简便,花费低廉,产生大量细胞膜碎片 缺点:慢,也许会损伤敏感蛋白质或者破坏蛋白质和细胞膜的相互作用,产量低 酶法裂解 常和其他技术一同使用,如反复冻融或渗透压破碎法;溶菌酶是破碎细菌细胞壁最常用的酶 优点:温和,可产生较大的细胞膜碎片 缺点:慢,产量低

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博凌科为解答:1、高速组织捣碎 :将材料配成稀糊状液,放置于筒内约1/3体积,盖紧筒盖,将调速器先拨至最慢处,开动开关后,逐步加速至所需速度。此法适用于动物内脏组织、植物肉质种 子等。2、玻璃匀浆器匀浆 :先将剪碎的组织置于管中,再套入研杆来回研磨,上下移动,即可将细胞研碎,此法细胞破碎程度比高速组织捣碎机为高,适用于量少和动物脏器组织。3、超声波处理法 :用一定功率的超声波处理细胞悬液,使细胞急剧震荡破裂,此法多适用于微生物材料,用大肠杆菌制备各种酶,常选用50-100毫克菌体/毫升浓度,在 1kg至10kg频率下处理10-15分钟,此法的缺点是在处理过程会产生大量的热,应采取相应降温措施。对超声波敏感和核酸应慎用。4、反复冻融法: 将细胞在-20度以下冰冻,室温融解,反复几次,由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀,使细胞结构破碎。5、化学处理法: 有些动物细胞,例如肿瘤细胞可采用十二烷基磺酸钠(sds)、去氧胆酸钠等细胞膜破坏,细菌细胞壁较厚,可采用溶菌酶处理效果更好。无论用哪一种方法破碎组织细胞,都会使细胞内蛋白质或核酸水解酶释放到溶液中,使大分子生物降解,导致天然物质量的减少,加入二异丙基氟磷酸 (dfp)可以抑制或减慢自溶作用;加入碘乙酸可以抑制那些活性中心需要有疏基的蛋白水解酶的活性,加入苯甲磺酰氟化物(pmsf)也能清除蛋白水解酥活 力,但不是全部,还可通过选择ph、温度或离子强度等,使这些条件都要适合于目的物质的提取。
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冻融、超声……
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苯甲基磺酰氟
PMSF
329-98-6
C7H7O2FS
174.19268