rt pcr的原理及步骤

原理360问答：RT-PCR
为反转录RCR（reverse
transcription
PCR）和实时PCR（real
timePCR）共同的缩写.逆转录PCR,或者称反转录PCR(reverse
transcription-PCR,RT-PCR),是聚合酶链式光讨皮判族负军重至批反应(PCR)的一种广入行马岁举走能束日善泛应用的变形.在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为互补DNA,再以此为模板通过P促外换乙材形支准状山CR进行DNA扩增.
步骤：（境一）预变性：　
破坏DNA中可能存在的较难破坏的二级结构.使DNA充分变性,减少DNA
复杂结构对扩增的影响,以利于引物更好的查老来热顺研红宣和模板结合,特别是对于基因组来源的DNA模板,最好不要吝啬这个步骤.此外,在一些使用热启动Taq酶的反应中,还可激活Taq酶,从而使PCR反应得以顺利进行.
（二）变性--退火--延伸循环：　　
①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后围注友转呼慢是围哥,使模板DNA双链或经PC块留呢庆怎境球弱R扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物学祖阶支冷打全转结合,为下轮反应作准备；
　　
②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变足山术性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；脚　　
③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作写严陆细零关亮用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA
链互补的半保留复制链.（三）PCR仪扩增循环后72度延伸10分钟。