我做电泳时不小心TEMED加多了一倍。

不是，TEMED和AP不会影响条带。它们只是胶凝固的催化剂。不信你做两块胶，一块用5ulTEMED，一块用50ulTEMED 试试，保证对条带没有任何影响。多加了TEMED，只会让胶凝固得更快。条带消失的原因很多，可能是蛋白降解，或者染色不佳，我跑电泳多年，从来没有见过TEMED和AP可以让条带消失的。