革兰氏染色阴性和阳性的区别?

革兰氏染色法细菌学广泛使用种鉴别染色法1884年由丹麦医师Gram创立
细菌先经碱性染料结晶染色而经碘液媒染用酒精脱色定条件下有细菌此色被脱去有被脱去因此把细菌分两大类前者叫做革兰氏阳性菌(G+)者革兰氏阴性菌(G-)观察方便脱色再用种红色染料碱性蕃红等进行复染阳性菌仍带紫色阴性菌则被染上红色有芽胞杆菌和绝大多数和球菌及所有放线菌和真菌都呈革兰氏正反应;弧菌螺旋体和大多数致病性无芽胞杆菌都呈现负反应

[原理]:革兰氏染色目前有三种观点:等电点学说、化学学说和渗透学说

1. 等电点学说革兰氏阳性菌等电点PH2-3比阴性菌(PH4-5)低加之碘弱氧化剂降低革兰氏阳性菌等电点致使两类菌等电点差异扩大因此阳性菌和碱性染料结合力比阴性菌更强

2.化学学说碘液菌体内与结晶紫结合又和菌体内核糖核酸镁盐-蛋白质复合物结合此结合物易被丙酮酒精脱掉呈革兰氏染色阳性因革兰氏阴性菌缺乏核糖核酸镁盐故对碘与结晶紫结合物摄取少且牢固易被丙酮酒精脱色而呈革兰氏染色阴性

3.渗透学说乙醇使阳性菌所含粘肽多糖脱水而致细胞壁间隙缩小通透性降低菌体内保留了染料-碘复合物呈紫色阴性菌含粘肽少细胞壁变化大通透性受影响菌体内染料-碘复合物较易透出失去紫色被复染成红色

[试剂]:Crystal violet(结晶紫)、Gram Iodine(碘液)、Decolourizer(丙酮酒精)、Safranin(稀释沙黄)

[操作]:

1.标本处理:(1).有菌部位标本痰液、粪便、各种拭子、创面等直接涂片

(2).无菌部位标本脑脊液、胸水、腹水、胆汁、尿液、关节液等应取适量标本(高达5-7ml),经3000rpm 离心10min.取沉渣涂片染色

2.涂片制作:菌液涂片时用接种环沾取菌液点载玻片上标本直接玻片上涂布;菌落涂片时先取生理盐水滴置玻片上用接种针挑取菌落盐水涂布制作涂片应自干燥并经火焰固定固定温度宜过高玻片背面接触手背烫准否则能使细菌形态改变固定涂片进行染色

3. 染色方法:

(1).加上Crystal violet(结晶紫)染色3-5秒或更久之用自来水冲洗之

(2).加上Gram Iodine(碘液)染色3-5秒或更久之用自来水冲洗之

(3).Decolourizer(丙酮酒精)脱色约5-10秒并用自来水冲洗之

(4).加上Safranin(稀释沙黄)染色3-5秒或更久之用自来水冲洗之

(5).吸干或空气凉干置油镜镜检

4.结观察:紫色革兰氏阳性红色革兰氏阴性

[报告方式]:革兰氏染色:检出革兰氏阳性球菌 ;革兰氏阴性球菌

检出革兰氏阳性杆菌 ;革兰氏阴性杆菌

[注意事项]:

1.标本涂片能太厚严格按操作要求进行

2.玻片通过火焰温度能太高

3.若涂片较厚应延长脱色时间直至出现紫色止

[临床意义]:通过革兰氏染色细菌分革兰氏阳性和革兰氏阴性便于临床治疗

[附]

1 沙黄(番红)Safranine T [C20H19ClN4=350.85]
红棕色粉末;碱基性染料水溶解乙醇易溶

2 碘液配制:0.01mol/l碘液--称取1.3g碘置于50mol烧杯加入2.5g碘化钾及25毫升蒸馏水断搅拌之使其溶解均匀再加0.2mol浓盐酸(体积质量1.19g/cm3)再加蒸馏水稀释1000mol溶液应贮藏棕色试剂瓶储于低温暗橱内有效期月左右

革兰氏阴性菌[大肠杆菌]代表大肠杆菌兼气性菌种般生存于肠道及厌氧还境革兰氏阴性菌细胞壁特徵有层out member 与阳性菌种同目前对大肠杆菌研究多除了般食物否有被污染指标外多分子生物学方面研究皆需要使用大肠杆菌当作实验宿主