需要温育2次。
双抗体夹心法原理：
①将含有已知抗体的抗血清吸附路盟棉纸友苗在微量滴定板上的小孔里，洗涤一次；
②加待测抗原，如两者我兵是特异的，则发生结合，然后把多余抗体洗除；
③加入与待测抗原呈特异反应的酶联抗体，使形成“夹心”；
④加入该酶的底物，若看到有色的酶解产物来自产生，说明在孔壁上存在相应的抗原。
如图所示
