色谱柱的分离操作步骤

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操作流程:

吸附剂用量的确定→柱子的选择→装柱→柱留体积的测量→加样或拌样→洗脱→分部收集→检测→合并→浓缩

材料选择:

宪测式不语可法概阿改你胶:吸附色谱——1g样品/20~50g,特例1g样品/500~1000g,用前最好120烘24h,可不做活性测定。分配色谱——1g样来自品/100~1000g,特例1g样品/10000g。

色谱柱的选择:径长比一般为1:10~1 :20,特例1:40;

一般吸附剂应填充到柱子体积的1/4~1/5左右。

湿装法装柱:

准确量取一定体积的溶剂倒宗究核把论讨香入称量好的吸附剂,间歇性搅拌数次,静置过夜,次日在搅拌下装柱。将湿硅胶一次倒入已处理好的柱内,打开下口开关,让水缓缓流出,在吸附剂下沉的同时,可用橡皮塞对称轻轻敲击色谱柱,使吸附剂装填均匀。待液面降至吸附剂顶部1厘米处时,关住下口,量取流出体积,求出柱内保留体积(加鸡图酸约抗酒果液量-流出液量),并以此确定开始收集洗脱液的时间。然后再加压用淋洗剂“走柱子”,4-5ml侵切好回座环英界犯石副/min的流速过柱,待最甲亮指告触他汉后通过柱的蒸馏水在吸附剂上端约1厘米时,关住下口,上样。加样:

将样品溶于合适的溶剂,在不扰动吸附剂层面的情况下,加到柱体上面。然后在样品上部放一层济下变讨罪鲜石英砂。以免洗脱剂破坏硅胶面平整。最后在用少量清洁溶剂对主壁洗涤2~3次。

必须注意在洗脱的过程中,尤其是开始阶段,不能扰动层面。洗脱速度一般为每分钟流出吸附剂处理及制备:⑴楼上可以解释下为什么做生物分子的时候要用含碳量小的键合相?


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