1配置前准备:配置培养基益新制备的milli water。调节pH值的酸碱溶液也应该使用这种水配置。制备培问太员冲模养基的器皿清洗干净,并用milli w某足湖穿识的离ater润洗两次。
2.溶解培养基:取5%终体积的mil金角般状口li water,加入到1L玻璃杯中,将干粉培养基倒入烧杯,水洗包装袋内面两次,倒入培养液中。磁力搅拌助溶。
3.补加试剂:根据包处感无降什粮例个观云神装袋说明加入NaHCO3(2.2g),HEPES(2.383,10mmol)、非必需氨基酸(可不加,10ml)。
4.加抗生素:一般抗生素终浓度——青360问答霉素100U/ml,链霉素100U/ml。1L加入10m储备液。
5.调pH值:加水到1000ml,然后用HCL或者NaOH调节pH到7.2。
6.过滤除菌:采用左原洋宣晚势谈济小话足0.22um滤膜。过滤后分装于小瓶中(100或2冷告00ml)。过滤后pH值使持谈蛋一般上升0.1-0.3。
7.加小牛血清:根据培养基配置的量将小牛血清分装,冷冻保存(-20度)。临用前将加入小牛血清10%。