Mtphagy dye 

Mtphagy dye is a mitochondria-selective, pH-sensitive fluorescent indicator with long-wavelength emission properties. Mtphagy dye localizes to mitochondria, exhibits weak fluorescence under neutral conditions, and becomes highly fluorescent under acidic conditions via protonation of its piperazine moiety, and remains anchored under membrane-depolarized conditions via its chloromethyl group. Mtphagy dye enables visualization of mitophagy, avoids mitochondrial damage, and is non-cytotoxic at experimental concentrations. Mtphagy dye can be used for the research of parkinson’s disease (Ex/Em = 500-560 nm/670-730 nm)^[1].

指南 (以下是我们推荐的方案，本方案仅提供指南，应根据您的具体需要进行修改)。
1. 染料制备
1.1 制备储存液
用无水 DMSO 配制 100 μM 的储备液。
注：储存液建议分装后于 -20 ℃ 或 -80 ℃ 避光保存。
1.2 工作液的配制
用预热好的无血清细胞培养基或 Hanks' HEPES 缓冲液稀释储存液，配制成 100 nM 的工作液。
注：请根据实际情况调整工作液浓度，且现用现配。
2. 细胞染色
2.1 移除细胞培养基，用 Hanks' HEPES 缓冲液或无血清培养基洗涤细胞两次，每次 5-10 分钟。
2.2 加入 100 nM 的工作液，37°C，孵育 30 分钟。
2.3 弃去上清，用 Hanks' HEPES 缓冲液或无血清培养基洗涤细胞两次，每次 5-10 分钟。
2.4 诱导自噬：加入含有特定线粒体自噬诱导剂 (如 CCCP (HY-100941) 等) 的培养基，在 37°C 培养箱中孵育 4-24小时。
2.5. 如需与溶酶体共染，可在线粒体自噬诱导的最后 30 分钟，向培养基中加入溶酶体染料进行共孵育。
2.6 弃去上清液，用 Hanks' HEPES 缓冲液或无血清培养基洗涤细胞两次，并在荧光显微镜下观察。


Mtphagy dye 在线粒体分离体系中呈现 pH 依赖性荧光增强效应，在中性 pH (7.4) 下荧光极弱，在酸性 pH (4.0) 下荧光强，且可滞留于线粒体结构内^[1]。
Mtphagy dye (0.1 μM) 在活 HeLa 细胞中呈现 pH 依赖性荧光增强效应，在中性细胞内 pH (7.4) 下荧光极弱，在酸性细胞内 pH (4.5) 下荧光强烈，且定位于线粒体^[1]。
Mtphagy dye (0.1 μM) 可在经 CCCP 处理的过表达 Parkin 的 HeLa 细胞中特异性标记 Parkin 依赖的线粒体自噬，在酸化线粒体中会出现荧光增强现象，且其信号会被 Bafilomycin A1 (HY-100558) 介导的线粒体自噬抑制作用消除^[1]。

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

939.90

C₅₇H₄₉Cl₂N₄O₃P

2137473-96-0

Room temperature in continental US; may vary elsewhere.

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• [1]. Iwashita H, et al. Live Cell Imaging of Mitochondrial Autophagy with a Novel Fluorescent Small Molecule. ACS Chem Biol. 2017;12(10):2546-2551.  [Content Brief]