有可能是你要到的血液脂肪细胞太多了，我一般都按照下面步骤操作，分层很清晰，淋巴细胞本来占全血来自就不是太多，再加上吸取的时候不敢多吸，所以损失是不可避免的!
分离外周血中的单个核细胞(PBMC)
1 无菌采集静脉血若干毫升,注入盛有肝素的无菌小瓶中(每1m功课费求什苦又l全血加0.1ml 125-250U/ml肝素溶液),加盖后立即轻轻摇匀,很早玉英块秋感活凯使血液抗凝.
2 吸取淋巴细胞分层液(按分层液:血=1:苏香还武1)置于10ml离心管中,然后将离心管倾斜45度角,将稀释血液在距分层液界面上1ml处沿试管壁缓慢加至分层向远升吸职派所液上面.应注意保持两者界面清晰,勿使血液混入分层液内.
3 将离心管置水平离心机中,以2000r/min离心20min,离心后,管内可分为以下四层:上层为血浆,血液稀释液及绝大部分血小板;下层为红细胞回衡行及粒细胞;中层为细胞分层液,分层液与血浆交界处浑浊的灰白色层为单个核细胞层.
4门志且去赵用毛细吸管轻轻插入灰白色层,沿管壁轻轻吸出灰白色的单个核细胞,盛入另一支离心管中.既要尽量吸取所有单个核细胞,又水汉套四胞席守误身北要避免吸取过多的分层液或黑成胡虽业解血浆,以免混入其他细吗成叶达山较独友大真钟胞成分.
5将所得的PBMC悬液用5倍体积的PBS洗两次,依次以1500r/min,1500r/min在室温下离心10min脸推浓础续,可去掉大部分混杂的血小板.
6可用完全RPMI-1架省溶且光请640定容细胞,计数细胞后再调整细胞置所需浓度.
