求助！刚刚开始做分子实验，但是转化的时候老不长菌，求大神帮我分析一下

刚刚做分子实验，有些地方可能操作不当，请大神指教！我的载体构建成功了，双酶切的时候载体和目的基因的条带都有，设计引物做定点突变，PCR之后跑胶验证是有很亮的条带的，说明P成功... 刚刚做分子实验，有些地方可能操作不当，请大神指教！我的载体构建成功了，双酶切的时候载体和目的基因的条带都有，设计引物做定点突变，PCR之后跑胶验证是有很亮的条带的，说明P成功了！之后我用DpnI消化酶消化模板，操作是说明书上的：nuclease-free water 32ul/10Xbuffer tango 4ul/DNA 2ul/DpnI 1-4ul不等，之后在37摄氏度消化一个小时，80摄氏度下20min使酶失活，之后把上述50ul消化体系全部加到感受态中冰镇30min,42摄氏度90s热激转化，再在冰上静止5分钟，把转化后的感受态直接加到刷选平板上，过夜之后还是不长菌，求大神给我指导指导！PS:我怀疑是感受态的原因，但是我的感受态没有做多久，而且做的时候验证了一下是可以用的！ 展开