活死染色怎么定量分析

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活死染色(live/dead staining)是细胞活性研使究中常用的一种方法,用于区分某一细胞总数中活细胞和死亡细胞的比例。常用的活死染色试剂是calcein-AM和ethidium homodimer-1(EthD-1),其中前者只能渗透到细胞膜完整的细胞内,形成绿色荧光,而后者只能渗透到细胞膜已破损的死亡细胞内,形成红色荧光。活死染色的分析可通过显微镜观察荧光图像或通过流式细胞术定量分析。

以下是活死染色的定量分析步骤铅锋:

1.细胞处理和加载特构变试剂

首先,蚂咐将需要检测的细呢出结星盟代古胞以适量密度接种在培养皿中,使其在适宜生长条件下继续培养。接着,用PBS即船医庆倒质径会等缓冲液洗涤细胞,去除死亡的或损伤的细胞。然后将适量量的calcein-AM和EthD-1活死染色试剂加入细胞培养液中。

2.显微镜观察

经过一定时间的荧光稳定化后,将样品获取到荧光显微镜上观察。在显微镜下,使用荧光过滤器(绿色和红色),观察最终信号。通过绿色荧光(calcein-AM)和红色荧光(EthD-1)的荧光强度比较,可以得环着望翻玉那出细胞总数,活细胞数,死亡细胞数的闷激纯数量关系。

3.流式细胞术分析

利用流式细胞仪定量分析活死染色结果,流式仪可以通过某些荧光标记,可以分离出活细胞和死亡细胞话例输着月凯,以及快速计数荧光的细胞。础慢继视在流式系统上,使用光敏探测器检测不同荧光信号,通过对荧光信号的定量分析,可以得出细胞总数,活细胞数,死亡细胞数的数量关系。

综上所述,活死染色通过利用活细胞和死亡细胞对染色试剂的选择性荧光染色,可以定量分析样品中活细胞和死亡细胞的相对数量比例。荧光显微镜和流式细胞仪是两种常用的定量分析方法,可以根据具体情况选择使用。

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