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荧光素-5-马来酰亚胺

MCE 国际站：Fluorescein-5-maleimide

品牌：MedChemExpress (MCE)

货号：HY-D0098

CAS：75350-46-8

中文名称：荧光素-5-马来酰亚胺

Synonyms：荧光素-5-马来酰亚胺; N-(5-Fluoresceinyl)maleimide

纯度：99.05%

存储条件：-20°C, protect from light *In solvent : -80°C, 6 months; -20°C, 1 month (protect from light)

运输条件：美国大陆的室温；其他地方可能有所不同。

产品活性：Fluorescein-5-maleimide 是一种荧光染料。Fluorescein-5-maleimide 可以检测真核细胞中的硫醇氧化还原状态。Fluorescein-5-maleimide 可以标记肽并用于检测带负电荷的纳米颗粒。Fluorescein-5-maleimide 可以标记肌动蛋白来探究其与心肌肌球蛋白结合蛋白C (cMyBP-C) 的相互作用，从而帮助开发小分子调节剂用于心力衰竭。Fluorescein-5-maleimide 可以筛选含有半胱氨酸残基的突变蛋白。Fluorescein-5-maleimide 的激发波长为 494 nm，发射波长为 519 nm。

生物活性： Fluorescein-5-maleimide 是一种荧光硫醇反应性染料，用于将荧光素与蛋白质结合（激发：494 nm，发射：519 nm）。

体外：Fluorescein-5-maleimide 荧光探针的配制[1] 1.1 制备储存液 用 d-PBS 配制 1 mM 的 Fluorescein-5-maleimide 储存液。 注：1) 避光保存。 Fluorescein-5-maleimide 用于检测细胞内硫醇氧化还原状态 1) 使用 Ficoll-Paque 密度离心法从静脉血中制备 PBMC，并在 d-PBS 中洗涤。 2) 清洗过的 PBMC (100 μL 中有 106 个细胞) 用抗人 CD3-APC 标记。 3) 用 0.1 μM Fluorescein-5-maleimide 染色，并通过流式细胞术分析。 Fluorescein-5-maleimide 荧光探针的配制[2] 1.1 制备工作液 用 DMSO 配制 50 mM 的 Fluorescein-5-maleimide。 Fluorescein-5-maleimide 荧光探针用于检测纳米颗粒 1) 将工作液以 5: 1 的摩尔比 (探针: 肽) 加入到含有 20.3 mM N-(2-羟乙基) 哌嗪-N’-乙磺酸-KOH、50 mM KCl 和 2 mM 三 (2-羧乙基) 膦的缓冲液的肽溶液 (4.06 mM) 中，用于标记肽。 2) 将 1) 中混合物 (终体积为 125 μL) 在室温下黑暗孵育 2 小时，并轻轻摇动。 3) 加入过量的 DDT (20 mM) 来淬灭反应。 4) 通过丙酮 (1 mL) 沉淀进一步纯化纯标记肽混合物。 5) 将 5 μL 荧光探针添加到 15 μL 的纳米粒子和 130 μL 的缓冲溶液中，检测两者相互作用。 6) 数据分析：通过标记肽的荧光强度变化或/和差分光散射来检测纳米颗粒-肽相互作用。 Fluorescein-5-maleimide 用于检测蛋白相互作用 (肌动蛋白与心肌肌球蛋白结合蛋白C (cMyBP-C))[3] 1) 将 50 μM 的 G-肌动蛋白在 20 mM Tris pH 7.5、0.2 mM CaCl2、0.2 mM ATP 的条件下，加入 3 M KCl (最终浓度为 100 mM) 和 0.5 M MgCl2 (最终浓度为 2 mM) 进行聚合，在 23 °C 下孵育 1 小时。 2) 加入 Fluorescein-5-maleimide (终浓度为 1 mM) ，在 23 °C 下标记 1 小时。 3) 加入五倍摩尔、过量的 DTT 来停止标记。 4) 将 0.25 μM 的 Fluorescein-5-maleimide-肌动蛋白和 0-20 μM 的 TMR-cC0-C2 (cMyBP-C 的 N 末端片段) 共同孵育。 5) 数据分析 (FLT-FRET 测定)：首先激发 Fluorescein-5-maleimide 并检测其 FLT，以测量从 Fluorescein-5-maleimide (供体) 到 TMR (受体) 的荧光共振能量转移 (FRET) 的变化，Fluorescein-5-maleimide-肌动蛋白的 FLT 降低 (FRET 增加) 表明结合。 MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。

Emission (Em)：505

Excitation (Ex)：488

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参考文献：

[1]. Wadley AJ, et al. Detecting intracellular thiol redox state in leukaemia and heterogeneous immune cell populations: An optimised protocol for digital flow cytometers. MethodsX. 2018 Nov 1;5:1473-1483.
[2]. Akinloye O, et al. Peptide-based fluorescence biosensors for detection/measurement of nanoparticles. Anal Bioanal Chem. 2017 Feb;409(4):903-915.
[3]. Bunch TA, et al. Drug discovery for heart failure targeting myosin-binding protein C. J Biol Chem. 2023 Dec;299(12):105369.
[4]. McLachlin DT, et al. A method of screening for mutant proteins containing cysteine residues using fluorescein-5-maleimide. Protein Expr Purif. 1996 May;7(3):275-80.