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E260

MCE 国际站：E260

品牌：MedChemExpress (MCE)

货号：HY-112097

CAS：1241537-79-0

纯度：99.05%

存储条件：粉末 -20°C 3 年 4°C 2 年 溶剂中 -80°C 2 年 -20°C 1 年

运输条件：美国大陆的室温；其他地方可能有所不同。

产品活性：E260 是一种 Fer/FerT 激酶抑制剂。

生物活性：E260 是一种 Fer/FerT 激酶抑制剂。 IC50 和目标：Fer/FerT 激酶^[1] 体外： E260 是一种 Fer 和 FerT 抑制剂，可选择性地诱发癌症中的代谢应激通过施加线粒体功能障碍和变形，以及消耗能量的自噬的开始，降低细胞 ATP 水平来影响细胞。为了证明 E260 直接靶向 Fer 和 FerT，使用这些酶的含有纯化激酶结构域 (KD) 的片段进行了体外激酶测定。该分析证明了 E260 对该结构域的直接抑制作用，这反映在与 ATP 孵育和 E260 浓度增加时 Fer/FerT KD 的自磷酸化水平显着降低。此外，对模拟的整个 Fer 蛋白中 E260 对接的计算分析表明，E260 与 Fer 的最高得分结合模式落在酶 KD 的 ATP 结合口袋中。为了测量 E260 从 Fer/FerT KD 的解离常数 (K_d)，使用递增浓度的 E260 进行微量热泳 (MST) 测试。该分析证实了 E260 与 Fer/FerT KD 的直接结合，并确定了 0.85?μM 的 K_d。为了检查 E260 胶束制剂对恶性细胞中 Fer 的影响，从未处理和 E260 处理的 SW620 CC 细胞中免疫沉淀激酶。当应用于转移性 IV 级 SW620 CC 细胞时，血清饥饿 16?h 并用 3?mM H₂O₂ 处理以激活 Fer，E260 表现出抑制作用对 Fer 激酶活性的影响反映在酶的自磷酸化活性受抑制上。为了表征 E260 对恶性细胞的影响，转移性 SW620 细胞用 E260 处理，然后进行生存力分析。 E260处理细胞开始死亡，处理24h后EC₅₀值为400?nM，处理24h后EC₅₀为300?nM 48?小时。在处理源自原发性胰腺导管癌的非转移性 PANC-1 细胞 72 小时后，E260 的 EC₅₀ 为 3.2?μM。此外，在用 4μM E260 处理后，这些细胞在用 E260 处理 72?h 后的最大死亡水平约为 70%。相比之下，转移性导管癌细胞 SU.86.86 被证明对 E260 更敏感，处理 72?h 后 EC₅₀ 为 1.1?μM，2?h 达到 100% 死亡水平。 μM E260^[1]。 体内： E260 在体内抑制异种移植物的进展。 E260 的药代动力学 (PK) 曲线是在小鼠中确定的。 E260 在血液中的 T_1/2 为 175?min，分布容积为 4244?mL/kg，表明该化合物在动物组织中的有效分布。为了评估 E260 对肿瘤生长的功效，将 SW620 细胞皮下引入免疫功能低下的“裸鼠”中。 E260 的施用导致整个实验过程中肿瘤进展的显着减弱，并且在治疗 22 天后平均肿瘤体积减少 10 倍。为了进一步证明 E260 在体内的抗癌活性，用 E260 处理带有 SW48 细胞衍生异种移植物的小鼠，并确定肿瘤进展情况。与对照组相比，用 E260 治疗的小鼠肿瘤进展减弱了 5-6 倍^[1]。

体外：E260 是一种 Fer 和 FerT 抑制剂，它通过造成线粒体功能障碍和变形以及启动耗能自噬来选择性地引起癌细胞中的代谢应激，从而降低细胞 ATP 水平。为了证明 E260 直接靶向 Fer 和 FerT，使用含有这些酶的纯化激酶结构域 (KD) 片段进行体外激酶测定。该分析证明了 E260 对该结构域的直接抑制作用，这反映在与 ATP 一起孵育并增加 E260 浓度时 Fer/FerT KD 的自磷酸化水平显著降低。此外，对模拟的整个 Fer 蛋白中 E260 对接的计算分析表明，E260 与 Fer 的最高得分结合模式落在酶 KD 的 ATP 结合口袋中。为了测量 E260 与 Fer/FerT KD 的解离常数 (Kd)，使用 E260 的递增浓度进行微尺度热泳动 (MST) 测试。该分析证实了 E260 与 Fer/FerT KD 的直接结合，并确定 Kd 为 0.85 µM。为了检查 E260 胶束制剂对恶性细胞中 Fer 的影响，从未处理和 E260 处理的 SW620 CC 细胞中免疫沉淀激酶。当应用于转移性 IV 级 SW620 CC 细胞时，这些细胞在血清饥饿状态下存活 16 小时，并用 3 mM H2O2 处理以激活 Fer，E260 对 Fer 激酶活性表现出抑制作用，这反映在酶的自身磷酸化活性受到抑制。为了表征 E260 对恶性细胞的影响，用 E260 处理转移性 SW620 细胞，然后分析活力。经 E260 处理的细胞开始死亡，处理 24 小时后的 EC50 值为 400 nM，48 小时后的 EC50 为 300 nM。E260 处理非转移性 PANC-1 细胞（源自原发性胰腺导管癌）72 小时后的 EC50 为 3.2 µM。此外，用 E260 处理 72 小时后，这些细胞的最大死亡率约为 70%，用 4 µM E260 处理后。相比之下，转移性导管癌细胞 SU.86.86 对 E260 更敏感，处理 72 小时后的 EC50 为 1.1 µM，用 2 µM E260 可达到 100% 的死亡率[1]。MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。

体内：E260 可抑制体内异种移植瘤的进展。在小鼠体内测定了 E260 的药代动力学 (PK) 曲线。E260 在血液中的 T1/2 为 175 分钟，分布容积为 4244 mL/kg，表明该化合物在动物组织中的分布有效。为了评估 E260 对肿瘤生长的疗效，将 SW620 细胞皮下植入免疫功能低下的“裸”鼠体内。E260 的给药导致整个实验期间肿瘤进展显著减缓，并且在治疗 22 天后平均肿瘤体积减少 10 倍。为了进一步证明 E260 在体内的抗癌活性，用 E260 治疗携带 SW48 细胞衍生异种移植瘤的小鼠，并测定肿瘤进展曲线。与对照组相比，用 E260 治疗的小鼠肿瘤进展减缓了 5-6 倍[1]。 MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。

动物实验：小鼠[1] 裸鼠接种 1.5 ×106 SW620 或 SW48 CC 细胞，并随机分成实验组。接种前 2 天，小鼠从自由饮食转为严格饮食，以降低血糖水平。此时，每个笼子里也关一只小鼠，以确保食物摄入均匀。饮食包括 3 克/只小鼠/天的标准食物，每天同一时间喂食。食物平均在 2 小时内消耗完毕，因此小鼠在接下来的 22 小时内不进食，直到每日定量。整个实验期间，小鼠都保持这种饮食。接种肿瘤 4 天后，小鼠被随机分组，并再次放入笼子中。每 12 小时给小鼠腹膜内注射一次 25 或 50 mg/kg 胶束 E260 制剂，共 22 天，对照组小鼠注射空胶束[1]。 MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。

细胞实验：使用 MultiTox-Fluor 多重细胞毒性试验测定细胞死亡水平。简而言之，将 SW620 CC 细胞接种到黑色 96 孔板中。24 小时后，当细胞完全附着时，以不同浓度施用 2 μM E260 或对照溶液并孵育所需的时间。孵育期后，将用于确定细胞死亡水平的检测荧光团添加到每个孔中。使用 ELISA 读数仪测定每个孔中荧光团发出的相对荧光强度，并将其与从标准曲线获得的荧光强度进行比较，以将其转化为细胞死亡率，并标准化为未处理的细胞，这些细胞也用于每次分析[1]。MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。

激酶实验：为了测试 E260 对 Fer/FerT KD 自身磷酸化活性的影响，将 0.5 µg Fer/FerT KD 蛋白孵育在 0.5 mL 激酶活性缓冲液（50 mM HEPES pH 7.5、10 mM MgCl2、1 mM EGTA、0.01% Brij-35）和 1 µM ATP 中。作为阴性对照，将 KD 蛋白孵育在不含 ATP 的相同缓冲液中。将含有 KD 和 ATP 的混合物在室温下孵育 1 小时，E260 溶于 DMSO 或仅与 DMSO 一起以递增的浓度溶解。孵育期后，通过 SDS-PAGE 分离孵育混合物中的样品，并使用特异性抗 Fer 和抗 pY 抗体进行 WB 分析，以评估 E260 的抑制作用，这反映在 Fer/FerT KD 的磷酸化水平降低[1]。 MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。

IC50 & Target：Fer/FerT kinase[1]

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参考文献：

[1]. Elkis Y, et al. A novel Fer/FerT targeting compound selectively evokes metabolic stress and necrotic death in malignant cells. Nat Commun. 2017 Oct 16;8(1):940.