Caspase-8 抗体 (YA554)

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Caspase-8 Antibody (YA554) 是一个兔来源、无偶联标记、抗 Caspase-8 的 IgG 单克隆抗体。

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WB: 蛋白质免疫印迹;
IHC-P: 石蜡切片样本的免疫组织化学;
IHC-F: 冰冻切片样本的免疫组织化学;
ICC/IF: 细胞免疫荧光;
IF-Tissue: 组织免疫荧光;
mIHC: 多重荧光免疫组化;
IP: 免疫沉淀;
ChIP: 染色质免疫沉淀;
FC: 流式细胞术;
ELISA: 酶联免疫吸附试验

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描述

Caspase-8 Antibody (YA554) is a Rabbit-derived and non-conjugated IgG monoclonal antibody, targeting to Caspase-8.

宿主

Rabbit

克隆性

Recombinant, Monoclonal

分子量

Predicted band size: 55 kDa;

Observed band size: 55 kDa

请注意：因蛋白存在修饰或聚体等情况，以实测为准，预测仅为参考。

反应种属

Human

蛋白数据库

Q14790

基因 ID

841 [NCBI]

免疫原

Synthetic peptide corresponding to Human Caspase-8.AA range:200-249.

应用 & 推荐
稀释比例

应用	稀释比
WB WB: 蛋白质免疫印迹	1:1000-1:2000
ICC/IF ICC/IF: 细胞免疫荧光	1:50-1:200
IHC-P IHC-P: 石蜡切片样本的免疫组织化学	1:50-1:200

敏感性	Endogenous	纯度	Protein A affinity purified.
偶联	Non-conjugated	修饰	Unmodified
同型	IgG

性状

液体

组分

Supplied in 1*TBS (pH7.4), 0.05% BSA and 40% Glycerol. Preservative: 0.05% Sodium Azide.

保存条件 & 期限

Stored at -20°C for 1 year. Avoid repeated freeze / thaw cycles.

运输条件

Shipping with blue ice.

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ALL WB ICC

Western blot analysis of extracts from Hela (lane 2(20μg), HEK293T (lane 3(20μg) and THP-1(lane 4(20μg) using Caspase-8 (HY-P80049) Rabbit mAb. Proteins were transferred to a PVDF membrane and blocked with 5% non-fat milk in TBST for 2 hour at room temperature. The primary antibody (1/1000) and Loading control antibody (Beta Actin, HY-P80438, 1/10000) was used in 5% non-fat milk in TBST at 4°C overnight. Goat Anti-Mouse/Rabbit IgG-HRP Secondary Antibody (1/10000) was used for 1 hour at room temperature.
Western blot analysis of extracts from HeLa (lane 2(20μg), THP-1 (lane 3(20μg), HepG2 (lane 4(20μg),using Caspase-8 Antibody. Proteins were transferred to a PVDF membrane and blocked with 5% BSA in TBST for 2 hour at room temperature. The primary antibody and Loading control antibody (Beta Actin, HY-P80438, 1/3000) was used in 5% BSA in TBST at 4°C overnight. Goat Anti-Mouse/Rabbit IgG-HRP Secondary Antibody (HY-P8004/HY-P8001, 1/10,000) was used for 1 hour at room temperature.
Immunocytochemistry analysis of Hela cells labeling Caspase-8 with Caspase-8 Antibody (HY-P80049)at 1/50 dilution. Cells were fixed in 4% paraformaldehyde for 15 minutes at room temperature, permeabilized with 0.1% Triton X-100 for 10 minutes at room temperature, then blocked with QuickBlock™ Blocking Buffer for Immunol Staining for 10 min at room temperature. Cells were then incubated with Caspase-8 Antibody (HY-P80049) at 1/50 dilution in QuickBlock™ Blocking Buffer for Immunol Staining at 4 ℃. Alexa Fluor® 488-conjugated AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG H&L（HY-P8002, Green) was used as the secondary antibody at 1/1,000 dilution. PBS instead of the primary antibody was used as the secondary antibody only control. The Nuclear counterstain was DAPI (Blue).
Immunocytochemistry analysis of Hela cells labeling Caspase-8 with Caspase-8 Antibody (HY-P80049) at 1/100 dilution. Cells were fixed in 4% paraformaldehyde for 15 minutes at room temperature, permeabilized with 0.1% Triton X-100 for 10 minutes at room temperature, then blocked with QuickBlock™ Blocking Buffer for Immunol Staining for 10 min at room temperature. Cells were then incubated with Caspase-8 Antibody (HY-P80049) at 1/100 dilution in QuickBlock™ Blocking Buffer for Immunol Staining at 4 ℃. Alexa Fluor® 488-conjugated AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG H&L（HY-P8002, Green) was used as the secondary antibody at 1/1,000 dilution. PBS instead of the primary antibody was used as the secondary antibody only control. The Nuclear counterstain was DAPI (Blue).

背景

功能：硫醇蛋白酶在程序性细胞死亡中起着关键作用，它作为细胞凋亡、坏死性凋亡和细胞焦亡的分子开关，是防止胚胎发育和成年期组织损伤所必需的 (PubMed:23516580, PubMed:35338844, PubMed:35446120, PubMed:8681376, PubMed:8681377, PubMed:8962078, PubMed:9006941, PubMed:9184224)。启动蛋白酶通过介导效应 caspase 的切割和激活来诱导外源性凋亡，这些效应 caspase 负责 FAS/CD95 介导和 TNFRSF1A 诱导的细胞死亡 (PubMed:23516580, PubMed:35338844, PubMed:35446120, PubMed:8681376, PubMed:8681377, PubMed:8962078, PubMed:9006941, PubMed:9184224)。切割并激活效应 caspase CASP3、CASP4、CASP6、CASP7、CASP9 和 CASP10 (PubMed:16916640, PubMed:8962078, PubMed:9006941)。 CASP8 与衔接分子 FADD 结合后，会被募集至受体 FAS/TNFRSF6 或 TNFRSF1A (PubMed:8681376, PubMed:8681377)。由此形成的聚集体称为死亡诱导信号复合物 (DISC)，可激活 CASP8 的蛋白水解活性 (PubMed:9184224)。随后，活性二聚体酶从 DISC 中释放出来，并可激活下游的凋亡蛋白酶 (PubMed:9184224)。N 端前肽的蛋白水解片段 (称为 CAP3、CAP5 和 CAP6) 可能保留在 DISC 中 (PubMed:9184224)。除了诱导外源性凋亡外，该蛋白还作为坏死性凋亡的负调控因子发挥作用：它通过在“Asp-324”位点切割 RIPK1 发挥作用，这对于抑制 RIPK1 激酶活性至关重要，从而限制 TNF 诱导的凋亡、坏死性凋亡和炎症反应 (PubMed:31827280, PubMed:31827281)。此外，该蛋白还能通过介导 gasdermin-C 和-D (分别为 GSDMC 和 GSDMD) 的切割和激活来启动细胞焦亡：gasdermin 的切割促进其 N 端部分释放，该部分与细胞膜结合并形成孔道，从而触发细胞焦亡 (PubMed:32929201, PubMed:34012073)。MAP3K7/TAK1 失活后，该蛋白也能启动细胞焦亡 (基于相似性)。它还通过介导 TLR3 或 TLR4 下游 N4BP1 的切割和失活来调节先天免疫，从而促进细胞因子的产生 (基于相似性)。可能参与颗粒酶 B (GZMB) 细胞死亡通路 (PubMed:8755496)。切割 PARP1 和 PARP2 (PubMed:8681376)。不依赖于其蛋白酶活性，在 Tyr-380 位点磷酸化后促进细胞迁移 (PubMed:18216014, PubMed:27109099)；缺乏催化位点，可能干扰该复合物的促凋亡活性；缺乏催化位点，可能干扰该复合物的促凋亡活性；缺乏催化位点，可能干扰该复合物的促凋亡活性 (可能)。可作为半胱天冬酶级联反应的抑制剂 (PubMed:12010809)；缺乏催化位点，可能干扰该复合物的促凋亡活性。

亚细胞定位：细胞质；细胞核；细胞突起，片状伪足

表达水平：
组织特异性：异构体 1、异构体 5 和异构体 7 在多种组织中表达。在外周血白细胞、脾脏、胸腺和肝脏中表达最高。在脑、睾丸和骨骼肌中几乎检测不到。

异构体 & 翻译后修饰：Q14790 有 9 种异构体：Q14790-1：55391 Da (预测值)；Q14790-2：53768 Da (预测值)；Q14790-3：45929 Da (预测值)；Q14790-4：57701 Da (预测值)；Q14790-5：27484 Da (预测值)；Q14790-6：25862 Da (预测值)；Q14790-7：32330 Da (预测值)；Q14790-8：30707 Da (预测值)。 Q14790-9：61836 Da (预测值)。
p10 和 p18 亚基的生成需要与死亡诱导信号复合物 (DISC) 结合，而进一步的加工可能归因于活化蛋白酶的自催化活性。GZMB 和 CASP10 可能参与这些加工过程；CDK1 在有丝分裂期间对 Ser-387 的磷酸化抑制了蛋白水解激活并阻止了细胞凋亡 (PubMed:20937773)。SRC 对 Tyr-380 的磷酸化是通过与 SRC SH2 结构域相互作用介导的，并不影响二聚化或募集到死亡诱导信号复合物 (DISC)，但会负调控 DISC 介导的 CASP8 加工和激活，从而下调其促凋亡功能 (PubMed:16619028, PubMed:27109099)。 Tyr-380 的磷酸化也能增强其在迁移细胞中向伪足的定位 (PubMed:18216014)；(微生物感染) 紫色色杆菌 CopC 的 ADP-核糖体化作用阻断 CASP8 的加工，从而阻止 CASP8 的激活及其介导外源性细胞凋亡的能力；(微生物感染) 牛痘病毒 CRMA 死亡抑制蛋白的蛋白水解切割

亚基：由两个反平行排列的异二聚体组成的异四聚体，每个异二聚体由一个 18 kDa (p18) 亚基和一个 10 kDa (p10) 亚基构成 (PubMed:10508784)。它是死亡诱导信号复合物 (DISC) 的组成部分，该复合物由细胞表面受体 FAS/CD95 或 TNFRSF1A、衔接蛋白 FADD 和 CASP8 蛋白酶组成；CASP8 被募集到该复合物是 CASP8 加工成 p18 和 p10 亚基所必需的 (PubMed:8681376, PubMed:8681377, PubMed:9184224)。它是 AIM2 PANoptosome 复合物的组成部分，该复合物是一种驱动炎症细胞死亡 (PANoptosis) 的多蛋白复合物 (基于相似性)。它与 CFLAR 和 PEA15 相互作用 (PubMed:10442631)。与 TNFAIP8L2 相互作用 (基于相似性)。与 CASP8AP2 相互作用 (PubMed:16378960)。与 RFFL 和 RNF34 相互作用；通过蛋白酶体降解负调控 CASP8 (PubMed:15069192)。与 NOL3 相互作用；以线粒体定位和磷酸化依赖的方式降低 CASP8 活性，且该相互作用可被钙离子解离 (PubMed:15509781)。与 UBR2ca 相互作用 (PubMed:28602583)。与 RIPK1 相互作用 (基于相似性)。与受刺激的 TNFRSF10B 相互作用；该相互作用随后导致 CASP8 的蛋白水解切割和激活 (PubMed:18846110)。与 PIK3R1 相互作用 (Tyr-380 位点磷酸化)(PubMed:27109099)

RRID

AB_3102281

反应种属数据库

Entrez Gene: 841 Human

SwissProt: Q14790 Human

OMIM: 607271 Human

研究领域

Cell Biology

中文名

Caspase-8 抗体

文件资料

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Data Sheet (443 KB) SDS (251 KB)

COA (194 KB)

抗体使用指南 (1083 KB)

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Help & FAQs

Do most proteins show cross-species activity?
Species cross-reactivity must be investigated individually for each product. Many human cytokines will produce a nice response in mouse cell lines, and many mouse proteins will show activity on human cells. Other proteins may have a lower specific activity when used in the opposite species.

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